卸妝油皮膚刺激性斑貼試驗技術規范：從動物模型到人體評價的全流程風險評估

卸妝油皮膚刺激性斑貼試驗技術規范：從動物模型到人體評價的全流程風險評估

一、試驗設計與受試物制備

（一）受試物濃度與對照組設置

受試物處理：

1.原液組：未稀釋卸妝油（含油脂、表面活性劑及防腐劑）；

2.稀釋組：50%卸妝油（去離子水按1:1體積比稀釋），評估濃度依賴性刺激；

3.陽性對照：0.5%十二烷基*（SDS）水溶液（已知中度刺激）；

4.陰性對照：去離子水（無刺激性）12。

賦形劑與貼片選擇：

1.貼片類型：無紡布圓形貼片（直徑8 mm，面積0.5 cm2），每片負載0.2 mL受試物；

2.固定方式：低致敏醫用膠帶（3M Micropore），避免膠帶直接接觸皮膚引發刺激；

3.封閉性：使用鋁箔覆蓋貼片（封閉式斑貼），確保受試物與皮膚充分接觸3。

（二）動物模型與人體志愿者選擇

動物模型：

1.物種：新西蘭白兔（雌性，體重2.0-2.5 kg），每組3只；

2.皮膚準備：背部脫毛（面積5 cm×10 cm），脫毛后24小時檢查皮膚完整性（無劃痕、紅斑）；

3.適應期：實驗室環境適應5天（溫度23±2℃，濕度50±10%）4。

1.納入標準：18-65歲健康成人，皮膚類型Ⅰ-Ⅳ型（Fitzpatrick分類），近3個月未使用糖皮質激素；

2.排除標準：敏感肌、特應性皮炎史、妊娠哺乳期女性，樣本量≥20人（滿足統計學要求）5。

二、標準操作流程與觀察指標

（一）動物斑貼試驗步驟

貼片施加：

1.每只兔背部對稱放置4個貼片（原液、稀釋液、陽性對照、陰性對照），間距≥2 cm；

2.輕壓貼片確保無氣泡，使用彈性繃帶固定，防止動物抓撓。

暴露與移除：

1.暴露時間：24小時；

2.移除后處理：用溫水輕柔清洗殘留受試物，避免摩擦刺激；

3.觀察時間點：移除后30分鐘（急性反應）、24小時、48小時、72小時（延遲反應）2。

（二）Draize評分體系

反應類型評分標準（動物模型）評分標準（人體模型）

紅斑無（0）、輕微可見（1）、中度（2）、重度（3）、焦痂（4）無（0）、輕微（1）、明顯（2）、重度（3）

水腫無（0）、輕微（1）、中度（2）、重度（3）無（0）、輕微（1）、明顯（2）、重度（3）

總分紅斑分+水腫分（最高7分）原發性刺激指數（PSI）=（紅斑發生率+水腫發生率）/2

（三）人體斑貼特殊觀察指標

1.主觀癥狀：瘙癢、灼熱感（視覺模擬評分法VAS 0-10分）；

2.皮膚反應持續時間：記錄紅斑/水腫消退時間，超過72小時提示潛在慢性刺激；

3.重復激發試驗：對弱陽性結果（PSI 0.5-1.9）者，2周后再次貼片確認反應重現性5。

三、結果判定與風險分級

（一）刺激強度分級標準

動物試驗總分（Draize）人體PSI值刺激強度風險等級

0-0.4＜0.5無刺激低風險

0.5-1.90.5-1.9輕度刺激中風險

2.0-4.92.0-3.9中度刺激高風險

≥5.0≥4.0重度刺激ji高風險

（二）體外替代試驗驗證

EpiDerm™重組人表皮模型：

1.操作步驟：受試物暴露15分鐘→PBS清洗→MTT染色→檢測570 nm吸光度；

2.判定標準：相對細胞活力≥50%為無刺激，與動物試驗結果一致性85%6。

3D皮膚模型優勢：

無需動物倫理審批，試驗周期縮短至48小時，可評估香精、防腐劑等成分的協同刺激作用7。

四、影響因素與試驗優化

（一）關鍵影響因素

1.皮膚完整性：動物脫毛時避免刮傷（可采用化學脫毛劑硫化鈉，濃度8%）；

2.貼片停留時間：人體模型48小時暴露比24小時更易檢出延遲性刺激（如甲醛釋放體）；

3.環境濕度：高濕度（＞60%）可能增強水溶性成分的滲透，建議控制在50±5%3。

（二）配方優化建議

刺激性成分替代：用苯氧乙醇（≤1%）替代甲基異噻唑啉酮，降低防腐劑刺激風險；

油脂體系調整：增加霍霍巴油（20%-30%）可緩解表面活性劑對皮膚屏障的破壞；

pH值控制：調節至5.5-7.0（接近皮膚pH），減少酸堿刺激1。

五、法規要求與報告撰寫

（一）法規依據

中國：《化妝品安全技術規范》（2022年版）第四章皮膚刺激性/腐蝕性試驗；

歐盟：EC 1223/2009法規，要求對新原料進行體外替代試驗；

美國：FDA化妝品自愿注冊計劃（VCRP）

（二）報告核心內容

1.受試物信息（成分、濃度、批號）；

2.試驗設計（模型選擇、樣本量、對照組）；

3.原始數據（紅斑/水腫照片、評分記錄）；

4.結論與建議（如“本品為輕度刺激，建議添加舒緩成分"）。

關鍵詞：卸妝油；皮膚刺激性；斑貼試驗；Draize評分；重組人表皮模型

參考文獻

[1] 《化妝品安全技術規范》（2022年版）[S]. 國家藥監局.

[2] OECD Test No. 404 皮膚刺激性/腐蝕性試驗[S]. 2015.

[3] SCCS Guidance on Dermal Irritation Testing[S]. 2021.